n 產(chǎn)品簡介：

      該系列熒光染料是 TSA 技術的顯色試劑，可在組織或細胞的預期位置著色，染色結(jié)果可體現(xiàn)出所染靶標的表達模式和豐度。本產(chǎn)品為10T/100T的100X 染料母液，使用時按照合適比例進行稀釋，按照說明書推薦使用可用10次/100次染色。

酪酰胺信號放大(TSA，Tyramide signal amplification)技術是一類利用辣根過氧化酶（HRP）對靶蛋白進行標記的酶學檢測方法，類似常規(guī)免疫組化的 DAB 顯色方法,TSA 技術同樣采用 HRP 標記的二抗，同樣有對應的“顯色”步驟(HRP 催化加入反應體系的酪胺熒光素底物，產(chǎn)生活化熒光底物，活化底物可與抗原上的酪氨酸等殘基共價結(jié)合，使樣品上穩(wěn)定的共價結(jié)合酪胺熒光素。之后用熱修復法或者抗體洗脫液洗去非共價結(jié)合的一抗-二抗-HRP 復合物，重復下一種一抗-HRP二抗來第二輪孵育，換另一種酪胺熒光素底物，如此往復就可實現(xiàn)多重標記。）

TSA 詳細原理是利用酪胺 Tyramide 的過氧化物酶反應（酪胺鹽在 HRP 催化H₂O₂下形成共價鍵結(jié)合位點），產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物，該產(chǎn)物能與周圍的蛋白殘基（包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基）結(jié)合，這樣在抗原-抗體結(jié)合部位就有大量的熒光素沉積，結(jié)果使其檢測信號得到10-100倍增強。簡單來說，用這種方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的 HRP（而不是直接偶聯(lián)熒光素），來催化后續(xù)添加入體系的非活性熒光素。熒光素在 HRP 和過氧化氫的作用下被活化，跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價偶聯(lián)，使得蛋白樣品與熒光素穩(wěn)定結(jié)合。然后微波或煮沸或者水浴等熱修復處理，前一輪非共價結(jié)合的抗體被洗掉，共價結(jié)合的熒光素穩(wěn)定共價結(jié)合在樣本切片蛋白上。再換個一抗來第二輪孵育，周而復始。等到所有抗體孵育結(jié)束，熒光素都結(jié)合好后，最后去檢測結(jié)果。由于每次體系中都只有單一抗體孵育，因此無需擔心抗體交叉反應，以及一抗二抗種屬匹配問題,大大減少了實驗設計時不同種屬抗體選擇匹配的限制。也就是說如果用 TSA 技術，同一張片子上所有的靶標都可以選用特異性高的兔單克隆抗體。搭配同一支抗兔的 HRP二抗就可以進行實驗，而且信號放大的倍數(shù)大大增強。

n 保存條件：

冰袋（wet ice）運輸；4 ℃避光干燥保存，一年內(nèi)使用有效。

n 使用方法：

1.     染色前去除玻片上的 TBST buffer；

2.     配置染料工作液，取1 μL的100X染料母液，使用信號放大液按1:100稀釋為1X的工作液，信號放大稀釋液需自備（為1×TBST含0.003 % H2O2：1×TBST100 mL，加入100 μL 3 % H2O2，混勻即可，該稀釋液容易失效，建議現(xiàn)配現(xiàn)用）；

注：本產(chǎn)品的建議稀釋比1:100，實驗者也可根據(jù)實驗結(jié)果調(diào)整稀釋比例（建議稀釋比例范圍1:50 - 1:500）；

3.     用移液器在玻片上滴加染料工作液100 μL，浸沒組織區(qū)域。

4.     室溫保濕震蕩孵育10 min。

5.     使用1X的TBST bufer 浸洗玻片，室溫浸片 3 min，重復三次。

6.     微波修復（微波中火8 min?；?/span>8 min轉(zhuǎn)中低火7 min，去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗，此過程中應防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片），室溫自然冷卻。

7.     滅菌水洗片1次，1X的TBST buffer 浸片2 min。

8.     單染結(jié)束，封片觀察或追加后續(xù)染色。

9.     如進行多重熒光標記，建議先孵育多抗，后孵育單抗；先孵育高豐度目的蛋白對應的抗體，再孵育低豐度目的蛋白對應的抗體。

n 注意事項：

1．本品要避光保存，室溫融化后，使用離心機進行短暫離心，干凈吸頭吹吸混勻后取用；

2．為了您的自身安全，實驗前請做好有效防護；

3．本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！