產(chǎn)品規(guī)格

產(chǎn)品簡介

本產(chǎn)品是一種以PKH67（綠色，Ex/Em:490nm，502 nm）親脂性熒光染料的膜整合標(biāo)記外泌體，PKH 染料是高度親脂性的長鏈羰花青熒光染料，其中脂肪族尾部可以迅速嵌入暴露的脂質(zhì)雙層并形成強的非共價相互作用，以用于研究外泌體的靶向、吞噬和運輸機制等，可使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光酶標(biāo)儀、流式細胞儀等熒光檢測系統(tǒng)進行檢測。

  PKH67也可用于常規(guī)細胞膜標(biāo)記，用于體外細胞標(biāo)記和體內(nèi)細胞追蹤，詳情見細胞膜染料產(chǎn)品。

產(chǎn)品組成

保存條件

  冰袋運輸，-20 ℃ 避光保存，有效期12個月（PKH67母液嚴(yán)格避光并擰緊蓋子，防止溶劑揮發(fā)），保存在Dilution C的染色工作液，需在使用前配置，且現(xiàn)配現(xiàn)用。

使用方法

需自備試劑和耗材：

（1）試劑： 1×PBS溶液，BCA蛋白濃度測試試劑盒（可做可不做）

一．外泌體準(zhǔn)備及定量（可做可不做）：

為保證最佳的染色效果，需進行BCA蛋白濃度測定以確定外泌體蛋白量，選擇合適的PKH67染色用量。

若為凍干外泌體，使用100 μL的Diluent C液或其他合適溶液（不含血清或BSA的PBS等溶液）分散；若為外泌體溶液，濃縮至合適體積，且保證體系較高的外泌體的純度和濃度，濃度過低可能會影響標(biāo)記效果。

二．PKH67染料工作液配置

1，試劑盒配備為1 mM（EtOH）的母液，使用前檢查是否結(jié)晶，若有結(jié)晶，超聲或渦旋直至完全溶解后離心片刻，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失；取適量PKH67母液，先用Diluent C液稀釋10倍，配置為100 μM的工作液，取適量的工作液加入外泌體溶液，使用Diluent C液定容，使其體系標(biāo)記濃度在2~20 μM，推薦嘗試10 μM的終濃度。

如：10 μg外泌體染色，取2 μL母液，用18 μL的Diluent C液稀釋成100 μM的工作液，然后取10 μL工作液加入已經(jīng)稀釋好的100 μL外泌體溶液中渦旋混勻。

注：1，PKH67易水解，工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用；2，PKH26標(biāo)記終濃度需根據(jù)不同外泌體、外泌體顆粒數(shù)、純度等實驗體系通過預(yù)實驗進行優(yōu)化，且避免在很小(<100 μL)或很大(>5 mL)的體積下進行外泌體的標(biāo)記；3，PKH67母液不可直接加入外泌體溶液中，必須經(jīng)過Diluent C液稀釋后加入外泌體溶液；4，Diluent C液為親脂性膜染料標(biāo)記專用液，無生理鹽和緩沖劑，最大化染料溶解性，減少PKH染料的自聚集，因此標(biāo)記體系盡可能在Diluent C液進行。

三．PKH67染色及終止

加入后孵育1-5分鐘，然后用等體系體積的標(biāo)記終止液（1% BSA）來結(jié)合多余的染料。

注：1，標(biāo)記孵育時間不可過長，通常不能超過10分鐘，標(biāo)記時間過長可能會導(dǎo)致外泌體膜完整性喪失；2，以避免未標(biāo)記的游離PKH67染料后續(xù)直接染色細胞，建議空白設(shè)置對照（外泌體溶液換成PBS溶液，其他操作正常）以確定終止效果。

四．去除多余染料

按照外泌體純化方法（如SEC法）再次提取外泌體以去除多余染料或染色終止劑，或使用超濾管去除游離染料。

注：染色后的外泌體體系都需要進行純化處理，未標(biāo)記的游離PKH26染料后續(xù)將直接染色細胞，所有再次提取純化方法會損失一部分外泌體。

注意事項

1．為了您的自身安全，實驗前請做好有效防護。

2．PKH67易水解，母液建議分裝用封口袋于 - 20 ℃避光保存，工作液且現(xiàn)配現(xiàn)用。

3．PKH67應(yīng)用廣泛，還用于細胞膜的標(biāo)記，詳細使用說明見本司細胞膜染料PKH67粉末。

4．本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)!