產(chǎn)品規(guī)格

產(chǎn)品簡介

外泌體是由活細胞分泌的具有生物活性的膜結(jié)構(gòu)物質(zhì)，直徑在50-150nm左右，并且不能自行復(fù)制的具有脂質(zhì)雙分子層的小囊泡。外泌體廣泛分布于細胞上清，血液，尿液，腦脊液，唾液，滑液，羊水，牛奶中，在植物與細菌中也有分布。外泌體含有多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等物質(zhì)，在細胞間通訊、物質(zhì)運輸和免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著重要作用。

  外泌體純化SEC柱（SEC Exosome Purification Column）是通用型外泌體純化試劑盒配套重要組分，原理是當顆粒進入SEC柱中的多孔多糖樹脂時，更小的顆粒被困在孔隙中，它們從柱子中出來的時間被延遲。當液體流出柱子時，連續(xù)收集餾分。顆粒根據(jù)大小不同分布在各個餾分中，較大的顆粒先離開柱子，較小顆粒，蛋白等小分子后離開柱子。顆粒不與樹脂發(fā)生化學結(jié)合，保證分離穩(wěn)定性和可重復(fù)。

保存條件

  常溫運輸存儲，有效期 1 年。

使用方法

SEC柱的使用方法詳情見通用型外泌體純化試劑盒產(chǎn)品，SEC柱使用前需平衡到室溫，所用試劑需經(jīng)0.22 μm過濾處理。

（1）柱平衡：若柱保存在4℃，室溫放置30 min，置于重力柱支架上（自備），柱下部放置廢液收集燒杯。實驗前確保SEC柱子處于室溫后再打開頂部柱塞和底蓋，將管中保存液排空至底部出口無液體流出，向柱中加入15mL 無菌PBS洗滌填料（可分次加入），可讓液體全部流出。

（2）上樣：底部無液體流出時加入0.5 mL樣品（樣品不足0.5 mL用PBS稀釋混勻補足），讓樣品全部進入篩板。

（3）空隙體積：當樣品全部進入篩板，底部無液體流出后加入2.5 mL PBS等待PBS流過直至無液體流出，此過程底部流出0.5 mL+ 2.5 mL的體積為空隙體積（可丟棄的洗脫液）

（4）收集外泌體餾分：上步驟底部液體完全流出后，加入0.5 mL PBS，使用EP管收集流出液，收集體積為0.5 mL，標記為餾分1。餾分1完全流出后再加入0.5 mL PBS，收集流出液為餾分2。重復(fù)此步驟收集4個餾分（每一次收集需等待上一個餾分完全流出后才能加PBS），純度最佳為前3個餾分即1.5 mL 體積，高回收率推薦合并前4個餾分即 2mL 體積。

（5）柱再生：收集到所需體積后，用10 mL 再生液進行清洗，再用20 mL PBS 清洗，隨后可進行第二次上樣。

（6）柱儲存：如果要儲存以備將來使用，先用10 mL 再生液進行清洗，再依次用 20 mL PBS、20 mL去離子水20 mL的20%乙醇清洗，清洗結(jié)束后蓋上底蓋，倒入保存液（20%乙醇），蓋上頂蓋密封可置于4 ℃或常溫儲存。

注：再生液為通用型外泌體純化試劑盒組分，堿性，避免再生液清洗后直接添加去離子水或 20%乙醇來平衡純化柱，防止樹脂床內(nèi)的鹽沉淀并損壞柱，去離子水清洗可進一步洗去平衡過程中產(chǎn)生的鹽，防止鹽與 20%乙醇直接接觸產(chǎn)生結(jié)晶。

注意事項

1．為了您的自身安全，實驗前請做好有效防護。

2．為避免SEC柱中過濾堵塞，建議對其他粘度較高的的生物樣品進行過濾或離心處理，以去除較大的顆粒物。

3．當外泌體餾分用于后續(xù)高通量測序或者其他組學分析時，為避免交叉污染，建議使用新柱。

4．請注意使用過程中勿將柱子從高處摔落或摔打?qū)е轮菜榱?，洗脫過程避免柱內(nèi)液體流盡后，填料干放時間過長。

5．柱再生過程中不可避免會產(chǎn)生鹽，鹽沉淀影響填料性能，每根柱子重復(fù)使用次數(shù)建議不超過5次。

6．本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)!