產(chǎn)品規(guī)格

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

外泌體是由活細(xì)胞分泌的具有生物活性的膜結(jié)構(gòu)物質(zhì)，直徑在50-150nm左右，并且不能自行復(fù)制的具有脂質(zhì)雙分子層的小囊泡。外泌體廣泛分布于細(xì)胞上清，血液，尿液，腦脊液，唾液，滑液，羊水，牛奶中，在植物與細(xì)菌中也有分布。外泌體含有多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等物質(zhì)，在細(xì)胞間通訊、物質(zhì)運(yùn)輸和免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著重要作用。

膜特異性外泌體富集試劑盒（磁珠法）采用獨(dú)特的分離技術(shù)特異性識(shí)別外泌體的膜結(jié)構(gòu)，脂質(zhì)探針靶向捕獲外泌體，再通過與磁珠孵育從血清/血漿中收集外泌體，快速從血清/血漿中獲得大量完整的外泌體顆粒，清洗后獲得磁珠-外泌體的復(fù)合體，可直接裂解用于下游蛋白分析。

  本試劑盒專用于血漿血清樣本，不適用于細(xì)胞壁上清，腦脊液，尿液等樣本。

產(chǎn)品組成及保存條件

注：脂質(zhì)探針和磁珠組分需要搖勻混合后再使用。

使用方法

需自備試劑和耗材：

（1）試劑：待分離的EDTA抗凝血； 1×PBS溶液

（2）裝置及耗材：① 4 °C搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀②磁力架；③離心機(jī)④5 mL EP管；1.5 mL EP管

一．樣本預(yù)處理：

新鮮血液樣本建議參照以下步驟進(jìn)行血漿分離：

1，取1~2 mL的新鮮EDTA抗凝血，加入1.5 mL離心管中，3000 g轉(zhuǎn)速下4 °C離心20 min。

2，取黃色上清液于新的1.5 mL離心管中，12000 xg，4 °C離心10 min。

3，取上一步操作的上清液于新的EP管中，-80 °C保存或者立即實(shí)驗(yàn)。

二．探針孵育

4，吸取2 mL脂質(zhì)體稀釋劑于5 mL的離心管中，加入15 μL脂質(zhì)探針(使用前先震蕩混勻)。

5，吸取0.5 mL 的4 °C預(yù)冷的血清/血漿樣本，加入稀釋后的脂質(zhì)探針溶液中，上下顛倒15次，置于4 °C搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀孵育30 min，搖床速度設(shè)置為約50 rpm。

注：此體系可純化0.5 mL 的血清/血漿樣本，為最佳分離效率體系及比例，可以按比例增加血清/血漿處理量，但外泌體的分離效率略有下降。

三．準(zhǔn)備磁珠

6，吸取0.1 mL磁珠(使用前先震蕩混勻)于新的1.5 mL的離心管中，加入1 mL磁珠清洗液，于磁力架中靜置3 min。

7，吸棄上清液，加入1 mL的磁珠清洗液，震蕩混勻，置于磁力架上靜置3min，再重復(fù)清洗一次。

四．磁珠捕獲

8，吸棄磁珠清洗液，探針孵育后的血清/血漿樣本加入其中，輕輕重懸磁珠，并轉(zhuǎn)移至5 mL離心管于室溫?fù)u床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀孵育30 min，速度設(shè)置為約60 rpm；

9，孵育完成后，樣本轉(zhuǎn)移至2個(gè)1.5 mL離心管置于磁力架上靜置3 min，吸棄上清。

五．磁珠捕獲后清洗

10，向上步驟的磁珠沉淀加入外泌體清洗液1 mL，于磁力架上靜置3 min，吸棄上清液清洗，重復(fù)清洗兩次。

11，吸棄上清后，向管中加入50~100 μL PBS，震蕩后的溶液即為含有外泌體的磁珠溶液，可保存于-80 °C的冰箱中，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)

注意事項(xiàng)

1．為了您的自身安全，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)做好有效防護(hù)。

2．清洗后獲得的為磁珠-外泌體的復(fù)合體，可直接裂解用于下游蛋白分析，但其他表征如NTA或TEM 分析會(huì)受到影響。

3．本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！