| 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 售價(jià) |
| FNK001 | 100T | ￥1380 |
| FNK002 | 500T | ￥3880 |
產(chǎn)品簡介
Firefly&NLuc Luciferase Reporter Gene Assay Kit首先以D-熒光素鉀鹽為底物來檢測(cè)Firefly熒光素酶報(bào)告基因的活性，之后在淬滅該螢光反應(yīng)的同時(shí)，以新型底物HFFZ檢測(cè)NLuc熒光素酶報(bào)告基因的活性。該試劑盒具有靈敏度高、穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，可在單個(gè)樣品中同時(shí)檢測(cè)Firefly熒光素酶和NLuc熒光素酶的活性，適用于雙報(bào)告基因檢測(cè)。
產(chǎn)品組分
組分編號(hào) | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 |
FNK001/100T | FNK002/500T |
FNK001-A/FNK002-A | 細(xì)胞裂解液 | 20 mL | 100 mL |
FNK001-B/FNK002-B | Firefly熒光素酶檢測(cè)試劑 | 10 mL | 50 mL |
FNK001-C/FNK002-C | NLuc熒光素酶檢測(cè)緩沖液 | 10 mL | 50 mL |
FNK001-D/FNK002-D | NLuc熒光素酶底物（50×） | 200 μL | 1 mL |
保存條件
-20 ℃保存，6 個(gè)月有效；-80 ℃保存，一年有效。螢火蟲熒光素酶檢測(cè)試劑和NLuc熒光素酶底物（50×）建議 -80 ℃避光保存。
使用說明
1.裂解細(xì)胞：將細(xì)胞裂解液充分混勻后，按如下方式加入報(bào)告基因細(xì)胞裂解液，充分裂解細(xì)胞。
1) 對(duì)于貼壁細(xì)胞：吸盡細(xì)胞培養(yǎng)液后，參考下表加入適量的報(bào)告基因細(xì)胞裂解液；對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心去上清后，參考下表加入適量報(bào)告基因細(xì)胞裂解液。
器皿類型 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
細(xì)胞裂解液（微升/孔） | 100 | 150 | 200 | 300 | 500 |
冰上孵育5-10 min ，充分裂解細(xì)胞。
注：如果熒光素酶的表達(dá)水平比較低，可以嘗試使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小為100微升。
2) 充分裂解后，10,000-15,000×g離心3-5分鐘，取上清用于測(cè)定。（選做）
注：細(xì)胞裂解后可以立即測(cè)定熒光素酶，也可以先凍存，待以后再測(cè)定。凍存樣品需融解，并達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。裂解產(chǎn)物可在4 ℃保存12 h，-20 ℃/-80 ℃可長期存放。
2.試劑準(zhǔn)備：
1) 融解Firefly熒光素酶檢測(cè)試劑和NLuc熒光素酶檢測(cè)緩沖液，并達(dá)到室溫。NLuc熒光素酶檢測(cè)底物(50×)置于冰浴或冰盒上備用。
注：螢火蟲熒光素酶檢測(cè)試劑建議分裝使用，盡量避免反復(fù)凍融。
2) 按照每個(gè)樣品需100 μL檢測(cè)液的量，取適量NLuc熒光素酶檢測(cè)緩沖液，按照1:50加入NLuc熒光素酶檢測(cè)底物(50×)配制成NLuc熒光素酶檢測(cè)工作液。
例如，980 μLNLuc熒光素酶檢測(cè)緩沖液中加入20 μLNLuc熒光素酶檢測(cè)底物(50×)充分混勻后即可配制成約1 mL NLuc熒光素酶檢測(cè)試劑。
注：NLuc熒光素酶檢測(cè)工作液建議現(xiàn)配現(xiàn)用，工作液配制后經(jīng)凍融再次使用可能會(huì)影響測(cè)試結(jié)果。
3.加樣檢測(cè)：
1) 取20 μL裂解液加至待檢測(cè)的96孔板中，按照實(shí)驗(yàn)需求，可設(shè)置3-5個(gè)重復(fù)孔。
2) 加入100 μL螢火蟲熒光素酶檢測(cè)試劑，震板混勻，檢測(cè)螢火蟲熒光素酶的活力，檢測(cè)盡量在1小時(shí)內(nèi)完成。
3) 加入100 μL NLuc熒光素酶檢測(cè)試劑，震板混勻，檢測(cè)NLuc熒光素酶的活力，檢測(cè)盡量在1小時(shí)內(nèi)完成。
7.分析數(shù)據(jù)：
①實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康模诿總€(gè)培養(yǎng)板中都應(yīng)設(shè)置對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組。為了保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，理論上每個(gè)實(shí)驗(yàn)組（包括對(duì)照組）都應(yīng)當(dāng)減去空白對(duì)照組的螢火蟲和NLuc熒光素酶的發(fā)光測(cè)量值。
a.空白對(duì)照組：
背景F：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞+Firefly熒光素酶檢測(cè)試劑。
背景R：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞+Firefly熒光素酶檢測(cè)試劑+NLuc熒光素酶檢測(cè)試劑。
注：空白對(duì)照組的樣品量必須與實(shí)驗(yàn)樣品量相同，包含與實(shí)驗(yàn)樣品相同的培養(yǎng)基/血清組合，并加上完全相同的檢測(cè)試劑。
b.實(shí)驗(yàn)組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)化合物處理(即實(shí)驗(yàn)組F和實(shí)驗(yàn)組R)。
c.對(duì)照組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞不經(jīng)處理，用以標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果(即對(duì)照組F和對(duì)照組R)。
②計(jì)算結(jié)果：
實(shí)驗(yàn)組比值=(實(shí)驗(yàn)組F-背景F）/(實(shí)驗(yàn)組R-背景R)。
對(duì)照組比值=(對(duì)照組F-背景F）/(對(duì)照組R-背景R)。
表達(dá)倍數(shù)=實(shí)驗(yàn)組比值/對(duì)照組比值。
注意事項(xiàng)
1.反應(yīng)溫度：酶促反應(yīng)對(duì)溫度較為敏感，加樣檢測(cè)前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫（20-25 ℃）再使用，可將裂解液、檢測(cè)試劑、檢測(cè)緩沖液在室溫或不超過25oC的水浴中融解并混勻后使用；
2.檢測(cè)儀器：能檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同，測(cè)得的光信號(hào)值也會(huì)不同。對(duì)于同一樣品的檢測(cè)，不同儀器的數(shù)值不可橫向比較；
3.測(cè)定時(shí)間：樣品和測(cè)定試劑混合后即可進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定時(shí)間通常為1-10秒?yún)^(qū)間內(nèi)，增加檢測(cè)時(shí)長會(huì)同時(shí)增加樣本和本底的熒光讀值，根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況也可以測(cè)定更長或更短時(shí)間，但是同一批樣品宜使用相同的測(cè)定時(shí)間；
4.檢測(cè)板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光白色酶標(biāo)板。黑色酶標(biāo)板也可用，但因黑色會(huì)吸收光信號(hào)，可能會(huì)降低信號(hào)；
5.通常加入NLuc熒光素酶檢測(cè)緩沖液后對(duì)上一步Firefly熒光素酶的抑制可達(dá)到99%以上，但可能殘留微量活性，因此在轉(zhuǎn)染時(shí)需將NLuc熒光素酶的表達(dá)量控制在其RLU讀值與螢火蟲熒光素酶相當(dāng)或略高的水平。
6.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套；
7.本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)!