產(chǎn)品規(guī)格

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產(chǎn)品簡介

本試劑盒根據(jù)螢火蟲熒光素酶（firefly luciferase，也稱熒光素酶）催化熒光素產(chǎn)生熒光時需要ATP提供能量研制而成。當(dāng)螢火蟲熒光素酶和熒光素都過量時，在一定的濃度范圍內(nèi)熒光的產(chǎn)生和ATP的濃度成正比從而高靈敏地檢測溶液中的ATP濃度。本試劑盒ATP的最低檢測濃度為0.1 nM，線性范圍為0.1 nM-10 μM。

產(chǎn)品特點

•  樣品制備簡單

• 靈敏度高，線性范圍寬，在0.1 nM至10 μM范圍內(nèi)有良好檢測效果；

•  讀數(shù)穩(wěn)定：在開始反應(yīng)后 10 分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光無明顯下降；

• 使用方便快捷：通常 10-20 個樣品可以在 30-60 分鐘內(nèi)測定完畢。

產(chǎn)品組成

保存條件

干冰運輸；-20℃ 保存，12 個月有效。

使用說明

1.樣品測定的準(zhǔn)備：(注意：樣品裂解需在4℃或冰上操作)
對于貼壁細胞：
吸除培養(yǎng)液，按照6孔板每孔加入200 μL裂解液的比例(即相當(dāng)于細胞培養(yǎng)液量 2 毫升的1/10)加入裂解液，裂解細胞。

裂解后4℃ 12000g離心 5 分鐘，取上清，用于后續(xù)的測定。（選做）
對于懸浮細胞：
用離心管離心沉淀細胞，棄上清，輕輕彈散細胞，按照6孔板每孔的細胞量加入200 μL裂解液的比例加入裂解液，裂解細胞。

裂解后4℃ 12000g離心5分鐘，取上清，用于后續(xù)的測定。（選做）
對于組織樣品：
按照每 20 mg 組織加入約 100-200 μL裂解液的比例加入裂解液，然后用玻璃勻漿器或其它勻漿設(shè)備進行勻漿。充分勻漿可以確保組織被完全裂解。裂解后 4℃ 12000g 離心5分鐘，取上清，用于后續(xù)的測定。

注：裂解后樣品中的ATP可在-20℃保存至少一周。
2.標(biāo)準(zhǔn)曲線測定的準(zhǔn)備：
冰浴上融解待用試劑，把ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液用ATP檢測裂解液稀釋成適當(dāng)?shù)臐舛忍荻?。具體的濃度需根據(jù)樣品中ATP的濃度而定。初次檢測可以檢測 0.01、0.03、0.1、0.3、1、3和10 μM這幾個濃度，該濃度梯度僅做參考，在后續(xù)的實驗中，可以根據(jù)樣品中 ATP 的濃度對標(biāo)準(zhǔn)品的濃度范圍進行適當(dāng)調(diào)整。

3.ATP檢測工作液的配制：
按照每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品需100 μL ATP檢測工作液的比例配制適當(dāng)量的ATP檢測工作液。把待用試劑在冰浴上融解。
4.ATP濃度的測定：
a.加100 μLATP檢測工作液到檢測孔或檢測管內(nèi)。室溫放置 3-5 分鐘，以使本底性的ATP全部被消耗掉，從而降低本底?？梢砸淮涡园?nbsp;10-20 個檢測孔或檢測管分別加上100μLATP檢測工作液，從而節(jié)省時間。
b.在檢測孔或檢測管內(nèi)加上20 μL樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，迅速用槍(微量移液器)混勻，至少間隔2秒后，用化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃儀測定RLU值或CPM。(注：樣品的體積可以自行在10-100 μL范圍內(nèi)調(diào)節(jié)。如果樣品中的ATP濃度比較低則可以加入50-100 μL樣品，如果樣品中ATP濃度比較高則可以加入較小體積的樣品，同時標(biāo)準(zhǔn)品也需要使用相同的體積。如果樣品中ATP的濃度特別高，可以用ATP檢測裂解液稀釋樣品后再測定。

注意事項

1.本試劑盒的檢測試劑中含有熒光素酶，為取得良好的使用效果，可以進行分裝保存，但需注意分裝的容器不能有ATP污染；

2.熒光素酶的活性對溫度比較敏感，所以反應(yīng)前細胞和ATP檢測試劑均需平衡至室溫后再進行測定。請勿室溫存放；

3.檢測時需使用適合于細胞培養(yǎng)的白色或黑色的 96 孔板或 384 孔板。如果使用普通透明的 96 孔板或 384 孔板，相鄰孔之間會產(chǎn)生相互干擾；

4.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套。

5.本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

實驗數(shù)據(jù)：

*博鷺騰試劑盒檢測的發(fā)光信號在30 min內(nèi)保持穩(wěn)定

*在0.1 nM至10 μM范圍內(nèi)有良好檢測效果